同源重组的过程？

一、同源重组的过程？

同源重组（Homologous Recombination) 是指发生在非姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。

同源重组需要一系列的蛋白质催化，如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等；以及真核生物细胞内的Rad51、Mre11-Rad50等等。同源重组反应通常根据交叉分子或Holliday结构（Holliday Juncture Structure) 的形成和拆分分为三个阶段，即前联会体阶段、联会体形成和Holliday 结构的拆分。

二、同源重组载体构建步骤？

回答如下：同源重组载体构建步骤如下：

1.设计引物：设计用于扩增目的基因的引物，其中包括同源臂序列。

2.扩增同源臂序列：使用引物扩增同源臂序列，通常选择高保真酶来确保扩增的准确性。

3.切割载体和目的基因：使用限制酶切割载体和目的基因，以产生可兼容的黏性末端。

4.连接同源臂和目的基因：使用DNA连接酶连接同源臂和目的基因。

5.转化宿主细胞：将重组载体转化到适当的宿主细胞中，例如大肠杆菌。

6.筛选正常克隆：使用选择性培养基筛选正常克隆，通常使用抗生素等物质。

7.鉴定正常克隆：使用PCR、限制酶切割、测序等方法进行鉴定，确认是否成功构建了同源重组载体。

8.纯化目的基因：对纯化目的基因进行进一步的处理，如纯化、表达等。

三、同源重组引物设计方法

同源重组的基因克隆方法， 相比双酶切载体构建方法，该方法的构建过程有些不同。首先，靶基因片段扩增引物有别于常规引物设计；

其次，载体切割过程中只需要进行单酶切；

第三，载体和目的基因片段的连接是基于同源重组而不是粘性末端互补。

四、质粒的同源重组是什么原理？

那就要看是什么菌种的，有些菌种是重组酶缺陷的，比如TOP10、stbl3等等，有些菌种表达重组酶，只要有同源序列，就容易发生重组。你要好好看看菌种的说明书，看看是不是重组缺陷的。

五、同源重组基本原理？

同源重组反应严格依赖DNA分子之间的同源性，100%重组的DNA分子之间的重组常见于非姐妹染色体之间的同源重组，称为Homologous Recombination，而小于100%同源性的DNA分子之间或分子之内的重组，则被称为Hemologus Recombination。后者可被负责碱基错配对的蛋白如原核细胞内的MutS 或真核生物细胞内的MSH2-3等蛋白质“编辑”。

同源重组可以双向交换DNA分子，也可以单向转移DNA分子，后者又被称为基因转换（Gene Conversion)。由于同源重组严格依赖分子之间的同源性，因此，原核生物的同源重组通常发生在DNA复制过程中，而真核生物的同源重组则常见于细胞周期的S期之后。

六、同源重组引物怎么设计策略？

同源重组的基因克隆方法， 相比双酶切载体构建方法，该方法的构建过程有些不同。首先，靶基因片段扩增引物有别于常规引物设计；

其次，载体切割过程中只需要进行单酶切；

第三，载体和目的基因片段的连接是基于同源重组而不是粘性末端互补。

七、pcr与同源重组引物设计的比较？

pcr引物与同源重组引物设计有差异，一般pcr引物18bp～25bps，对长度没有特别的限制，能确保特异性扩增即可；同源重组引物有特定长度要求，如in fusion重组同源片段只能15～20bps，如果是基因组重组则要求50bps以上，因催化同源重组酶不同而对同源长度要求有差异。

八、同源重组构建质粒原理及方法？

原理依赖于限制性核酸内切酶,DNA 连接酶和其他修饰酶的作用,分别对目的基因和载体 DNA 进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起,再导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。

传统的构建重组质粒的方法为TA克隆。该方法需要将构建进载体的片段通过PCR技术引入合适的酶切位点扩增出来，随后与T载体进行连接。将连接好的质粒转化大肠杆菌进行扩增，随后对扩增好的质粒进行酶切，得到含有粘性末端的片段。将该片段与同样经过双酶切的载体进行连接，转化大肠杆菌后即可得到重组质粒。

九、同源重组法构建基因突变株原理？

同源重组反应严格依赖DNA分子之间的同源性，100%重组的DNA分子之间的重组常见于非姐妹染色体之间的同源重组，称为Homologous Recombination，而小于100%同源性的DNA分子之间或分子之内的重组，则被称为Hemologus Recombination。后者可被负责碱基错配对的蛋白如原核细胞内的MutS 或真核生物细胞内的MSH2-3等蛋白质“编辑”。

同源重组可以双向交换DNA分子，也可以单向转移DNA分子，后者又被称为基因转换（Gene Conversion)。由于同源重组严格依赖分子之间的同源性，因此，原核生物的同源重组通常发生在DNA复制过程中，而真核生物的同源重组则常见于细胞周期的S期之后。

十、基因重组的条件是什么，同源染色体配对会引起基因重组吗？

这不是一个充分必要条件。在重组过程中，来自姐妹染色单体的双链dna分子与另一同源姐妹染色单体之间的相互作用。同源姐妹染色单体互换不一定能引起基因重组。

在真核生物中，重组发生在减数分裂时期的同源染色体的非姐妹染色单体的dna分子之间相互交换对等的部分。

基因重组指在生物体进行有性生殖的过程中，控制不同性状的基因重新组合。其发生在二倍体生物的每一个世代中。

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